冬虫夏草是一种真菌，它主要寄生于活动的昆虫体内进行有机质的分解碳源、氮源和无机盐内等营养物质。人工栽培时必须合理地配制这类营养成份，才能满足它的生长要求。现筛选了以下几种最适宜冬虫夏草菌丝生长的原料及配方如下：
一、母种制作 培养基配方
1、马玲薯200克(煮汁)、葡萄糖20克、琼脂20克、磷酸二氢钾1克、硫酸镁1克、蛋白胨1克、牛肉膏0.5克、水1000ml。
2、蛋白胨1克、葡萄糖20克、酵母膏1克、磷酸二氢钾1克、硫酸镁1克、VB11克、VB121克、琼脂20克、 水1000ml。
3、豆芽500克(煮汁)、白糖20克、琼脂20克、磷酸二氢钾1克、硫酸镁1克、蛋白胨0.5克、水1000ml。将上述配方任选一组，按其它母种制作常规方法操作，分装于180×18试管的1/5，高压灭菌1.5磅维持30分钟，制成斜面培养基备用。
接种：待斜面培养基表面余水干后，放入无菌接种箱内接种，将分离的纯冬虫夏草母种挑取黄豆大一块放入斜面培养基上，每支母种可接10~15支，但母种的传代不超过二次，否则失去感染力。
培养：接种后，放置15~18℃条件下恒温培养。三天后菌丝开始萌发，淡黄色而旺盛的绒毛团菌丝向四周蔓廷，七天左右菌丝表面可产生子座(即草)，这种草虽然没有虫的寄主，它的营养成份与冬虫夏草完全一致，正常情况下10天左右菌丝可长满斜面培养基。
二、液体种制作 培养基配方
1、米汤(大米煮至半熟过滤)500ml、葡萄糖5克、磷酸二氢钾1克、硫酸镁1克、蛋白胨1克、牛肉膏1克、 VB11克、VB121克 。
2、面汤(煮面条后的汤)500ml、白糖5克、蛋白胨1克、牛肉膏1克、硫酸镁1克、酵母膏1克、 磷酸二氢钾1克 。
3、清泉水500ml、葡萄糖10克、蛋白胨2克、牛肉膏2克、磷酸二氢钾2克、硫酸镁2克、 VB12克、VB122克 。 将配好的营养液装入500ml的三角瓶内，每瓶装150ml，瓶口塞上棉塞，高压灭菌1.5磅30分钟。 接种培养：冷却后，放入接种箱内无菌操作，将母种培养基取手指头大一块放入液体瓶中，每支母种可接5-10瓶，置20~25℃条件下先静置培养三天，然后再同样温度下放入摇床振动培养，若没有摇床，每天把液体瓶用手摇3-5次，每次3-5分钟，经过10-15天的培养即成为液体种。 如果栽培量大，液体种不够的情况下，应根据生产量还可将液体种扩制液体种2-3次(级)，无论哪级液体种都可用于直接栽培冬虫夏草，但母种或液体种传代过多会影响效果。液体种不宜存放时间过长，一般在低温或避光条件下不超过一个月使用效果较好，最好是在栽培季节前制作液体种。
检验液体种是否培养成功：
方法是经过10-15天恒温和振动培养，从色泽上看没有明显变化，只有在停止振动三天后，液体表面逐渐出现黄白色菌丝，无任何异色现象，可证明液体种已培养成功，随着时间长久液体表面形成一层很厚的菌皮，在栽培使用时必须去掉表面这层过厚的菌皮利用清液。
三、固体菌种制作
冬虫夏草的栽培一般是使用液体菌种，固体菌种还可以试测虫草子座能否生长，也可以用固体培养基或PDA培养基直接栽出虫草，它在大米等固体培养基上或桑蚕上都能长出子座，在适宜的昆虫体上喷入液体种就能长出冬虫夏草。
培养基配方
1、将大米用水煮至半生过滤，装入罐头瓶内，用牛皮纸或塑料薄膜封口灭菌。
2、活玉米或活小麦直接装入罐头瓶内(若干品必须浸泡12小时以上)封口灭菌。
3、棉壳95%、米粉3%、黄豆粉2%、含水量60%，装瓶灭菌。在1.5磅压力下60分钟，或常压灭菌100℃保持5-6小时，冷却接种。
接种：在接种箱内无菌操作，无论固体母种或液体种都可接入固体培养基。母种可挑取培养基手指头大一块放在固体培养基表面，也可以用接种针沾取菌丝在固体培养基中搅拌均匀。液体种接种是将种液渗入固体培养基中摇匀，每瓶用种量不超过5ml。
培养：固体种需在15~18℃的暗光条件下培养，用液体种接的只需15-20天菌丝可长满瓶，用固体母种接的需要一个月时间菌丝才能长满瓶。